固定与脱水
固定剂选择:根据组织类型选择戊二醛、多聚甲醛,固定时间需严格控制以避免过度抽提。
脱水梯度:采用逐级上升浓度乙醇或丙酮(30%→100%),防止组织变形。硬组织需延长脱水时间或增加中间剂(如环氧丙烷)。
包埋与聚合
温度控制:OCT包埋需在-20℃至-80℃间快速冷冻;环氧树脂包埋需在60-70℃聚合24-48小时。
气泡排除:包埋时需用细针驱除组织周围气泡,确保包埋剂均匀渗透。
切片与染色
切片厚度:光学显微镜切片为3-5μm,电镜切片为50-100nm。
染色兼容性:OCT包埋切片可直接进行免疫组化;环氧树脂包埋切片需经蚀刻处理以增强抗原暴露。
应用场景与推荐
临床病理诊断
推荐:石蜡包埋(常规诊断)+ OCT包埋(快速冰冻切片)。
优势:石蜡切片稳定性高,适合长期存档;OCT切片快速,支持术中决策。
科研实验
推荐:环氧树脂包埋(电镜观察)+ OCT包埋(荧光免疫组化)。
优势:环氧树脂保留超微结构;OCT支持多重标记与活细胞检测。
特殊需求
脂肪组织研究:优先选择OCT包埋,减少脂质丢失。
骨组织研究:采用甲基丙烯酸甲酯包埋,保持硬度与切割性。
