细胞名称:B16F10
小鼠黑色素瘤高转移细胞ATCC细胞代次:P4
细胞规格:T25瓶(包邮)/2冷冻管(需加干冰运输费)
细胞冻存:无血清冻存液
细胞传代:第一次建议1:2
细胞收到后处理
培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(最好40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。(注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松,传代后建议一瓶用原瓶的培养基,另外一瓶用自己配的培养基,以便进行对比培养)
培养前的工作准备充分
包括耗材的处理、试剂的配置,无菌检验等等。
玻璃器皿的清洗。对于玻璃器皿(细胞瓶、装营养液的瓶子、小青m素瓶等)要先用洗衣粉刷干净(注意死角),然后冲干净。用酸液浸泡24 h以上,之后用清水冲洗10遍,除去残留酸液。瓶子之类,冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡24 h。晾干后包扎,160℃干烤2 h待用。
试剂配置。细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意pH值的调节。
无菌检验。主要采用过滤除菌:如抗生素、G-418溶液、各类培养基、丙酮酸钠等。有些可以采用高压灭菌,如PBS、D-Hank's等。
试剂分装保存
包括营养液、血清等。
血清特别重要。血清必须贮存于–20℃,如果一次无法用完一瓶,可将40~50ml分装于无菌酸处理瓶中,甚至置青m素瓶保存。一般厂商提供的血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。(一般情况下不影响细胞培养)
瓶装血清一定要逐步解冻:4℃冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
热灭活是指56℃,30分钟加热已解冻之血清。水浴锅升到56℃后,将血清放入,待温度升高到56℃后计时,一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。