高速逆流色谱仪是一种基于液-液分配原理，无需固体固定相即可分离天然产物中复杂成分的精密分析设备，广泛应用于中药有效成分分离、蛋白纯化及手性药物拆分领域。其核心价值在于克服传统色谱柱吸附导致的样品损失，实现高回收率和高分辨率的分离。为了获得重复性良好的分离图谱并延长仪器寿命，掌握正确的使用方法至关重要。以下是关于高速逆流色谱仪正确使用方法的具体介绍。
1、溶剂系统的选择与配置
根据样品极性，采用分析型薄层色谱筛选合适的溶剂体系（如正己烷--甲醇-水）。将选定溶剂按比例混合并静置分层，使用超声脱气15分钟，避免气泡进入分离柱。
2、管路连接与螺旋管填充
将聚四氟乙烯螺旋管紧密缠绕在离心鼓上，确保无松脱。启动“填充模式”，以10mL/min流速将固定相注入螺旋管，直至出口流出液体，记录注入体积。
3、转速与流速参数设定
设置分离柱转速为800-1200rpm，调节流动相流速为1-3mL/min，同时开启恒温循环水浴（25℃）。待系统压力稳定且基线平直后，方可进行下一步操作。
4、样品进样与馏分收集
使用进样阀将样品溶液推入管路，切换至“洗脱模式”。根据检测器信号（如紫外波长254nm）手动或自动收集目标馏分，每管收集时间可设为1-2分钟。
5、分离后系统清洗
结束后先停止流动相，再缓慢降低转速至0。使用正丁醇或乙醇冲洗管路残留溶剂，用氮气吹干螺旋管内部，防止密封圈粘连。
