NIH-3T3细胞是由美国国立卫生研究院（NIH）从NIH Swiss小鼠胚胎中建立的经典成纤维细胞系，1962年由Todaro和Green，因建株时每3天传代、每次接种3×10?个细胞而得名"3T3"。该细胞经五轮以上亚克隆后形成高度均一的亚株（ATCC编号CRL-1658），能无限传代且保持严格的接触抑制特性——在培养皿中形成汇合单层后即停止增殖，因此被视为"正常细胞"的标准模型。
核心特性方面，NIH-3T3细胞呈成纤维样形态（梭形或多角形），贴壁生长，倍增时间约22-24小时，饱和密度可达约5×10? cells/cm?。其突出的优势在于：①极易被DNA转染，是基因功能研究和癌基因鉴定的受体细胞——病毒癌基因src即通过转染NIH-3T3后筛选转化克隆而发现；②对肉瘤病毒转化灶形成和白血病病毒繁殖高度敏感，也易被SV40、多瘤病毒及化学致癌剂（如MCA）转化，是研究细胞转化机制的"金标准"；③可作为饲养层支持干细胞培养，也广泛用于信号通路（PI3K/AKT、MAPK等）、基因编辑（CRISPR/Cas9）、药物筛选及蛋白互作研究。
培养要点：推荐DMEM高糖+10%新生牛血清（NCS，非FBS）+1%，37℃、5% CO?培养。细胞贴壁较松，消化时间宜控制在1-3分钟，传代比例1:2至1:4，密度达80%即应传代，切忌过度汇合以免丧失接触抑制。冻存液为90%血清+10% DMSO，程序降温后转入液氮。需注意细胞对血清批次敏感，建议固定批次以保证实验可重复性。
