粘附分子ELISA试剂盒是一类专门用于定量检测样本中**可溶性粘附分子(sICAM、sVCAM、sE-selectin等)**含量的免疫学检测工具,也可用于细胞表面粘附分子的表达水平检测,核心是基于抗原-抗体特异性结合的酶联免疫吸附原理,是目前科研和临床检测粘附分子常用的工具之一。
一、核心作用原理(以常用的可溶性粘附分子双抗夹心法为例)
粘附分子是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质特异性黏附的糖蛋白,包括整合素、选择素、免疫球蛋白超家族等,在炎症、免疫应答、肿瘤转移等过程中发挥关键作用;部分粘附分子会从细胞表面脱落形成可溶性形式进入血清、血浆、细胞上清等体液样本中,可作为疾病标志物,试剂盒的检测原理基于双位点特异性结合的三明治夹心模式,步骤如下:
预包被与封闭 酶标板孔内预先包被针对目标粘附分子的高特异性捕获单克隆抗体,之后用BSA、脱脂奶粉等封闭液封闭板孔空白位点,消除后续非特异性吸附干扰。
目标分子捕获 加入待测样本(血清、血浆、细胞培养上清、组织裂解液等),样本中的可溶性粘附分子会与包被在板上的捕获抗体发生特异性结合,经孵育、洗涤去除未结合的杂质后,目标分子被特异性固定在孔内。
夹心复合物形成 加入酶标记的检测抗体(多为辣根过氧化物酶HRP标记,或先加生物*化检测抗体、再加链霉亲和素-HRP),该抗体识别目标粘附分子的另一独立抗原表位,与已结合的粘附分子形成「捕获抗体-粘附分子-酶标检测抗体」的三明治夹心复合物,再次洗涤去除未结合的检测抗体。
显色与定量 加入酶促反应底物(HRP体系常用TMB底物),酶催化底物发生显色反应,加入终止液(通常为2mol/L硫酸)终止反应后,产物颜色深浅与孔内结合的粘附分子量呈正相关。通过酶标仪读取450nm(或630nm校正)波长的吸光度(OD值),代入预先制备的标准曲线,即可计算出样本中粘附分子的精确浓度,检测灵敏度通常可达pg级。
二、特殊类型:细胞表面粘附分子检测原理
部分试剂盒用于检测细胞表面的粘附分子表达水平,原理略有差异:
先将待测细胞接种到酶标板中,经固定、封闭处理后,加入针对目标粘附分子的一抗结合;
再加入酶标记的二抗(抗一抗的种属特异性二抗)结合;
后续同样通过显色、测OD值定量,OD值与细胞表面粘附分子的表达量呈正相关,多用于细胞黏附、迁移、免疫应答相关的功能研究。
三、核心优势
特异性高:采用两个针对粘附分子不同表位的抗体进行双位点识别,交叉反应率低,检测结果准确;
通量高:单次可同时检测数十到上百份样本,适合批量样本筛查;
应用场景广:可适配血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等多种样本类型。