本规程适用于液相色谱分析中使用沃特世色谱柱(包括C18、C8、HILIC等反相或正相柱)的操作,旨在保证色谱柱的性能稳定、延长使用寿命,并确保分析结果准确可靠。
二、沃特世色谱柱操作前准备
检查色谱柱型号及规格,确保与分析方法匹配。
检查柱体有无破损、漏液,确认接口螺纹完好。
准备好流动相,使用前需过滤(0.22 μm 或 0.45 μm)并脱气,以防堵塞柱子或产生气泡。
开启色谱系统前,确认泵、检测器及管路连接完好。
三、色谱柱安装
先用相同流动相冲洗柱子接口,防止空气进入。
将色谱柱竖直安装在柱架上,避免横放或压弯。
确保进出口连接螺母紧固,但不要过紧,以免损坏接头。
初次使用新柱时,先以低流速(通常为方法推荐流速的50%)缓慢预冲洗30分钟以上,以平衡柱内填料。
四、使用操作
样品注入前,确保流动相稳定且无气泡。
避免高浓度、颗粒杂质或强腐蚀性溶液直接进入色谱柱。
分析过程中应控制柱温在厂家推荐范围内,防止热失活或压力异常。
避免流速骤变或反向冲洗,以免填料压实或损伤柱效。
五、柱后处理与保养
分析完成后,用推荐的洗脱液冲洗柱子至少10柱体积,移除残留样品和缓冲盐。
若短期不用,可用适宜的贮存液(通常为含一定有机溶剂的缓冲液)封存,避免空气进入。
定期检查柱压和柱效指标,如柱压显著升高或柱效下降,应考虑再生或更换。
六、注意事项
切勿用高于柱耐压的流速冲洗或使用强腐蚀性溶剂。
避免柱子在干燥状态下长期存放,防止填料干裂。
操作过程中如发现漏液、异常噪音或柱压过高,应立即停机检查。
使用新批次流动相或柱子前,需进行方法验证,确保分析结果一致。