不锈钢高压蒸汽灭菌器操作要点如下：
灭菌前准备
物品清洗与包装：所有需灭菌的玻璃器皿(如吸管、平皿、三角瓶等)需清洗并晾干。玻璃器皿应单独包装，吸管、平皿用纸包严密，金属筒需打开气孔；三角瓶塞好棉塞并用纸包，试管盖好盖，注射器需抽出管芯并用纱布包好。
灭菌器检查：检查灭菌器门开关是否灵活，橡皮圈是否完好且平整；压力表在蒸气排尽时是否归零；通蒸气或加热后观察是否漏气，压力表与温度计显示是否吻合，管道有无堵塞；对有自动电子程序控制装置的灭菌器，需检查预设程序是否符合灭菌要求。
放置物品：将包装好的灭菌物品放入灭菌器内，大型高压蒸气灭菌锅放置物品不应超过锅内容积的80%，物品应放在锅内搁架上或铁丝筐中；手提式高压灭菌锅则将物品分别包扎后直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。物品摆放高度需低于腔体，避免堵塞顶部排气阀门；敷料需装在不锈钢器皿中并打开通气小孔；液体和培养基灭菌时，液体灌装体积不超过容器的3/4，瓶口选用棉花纱塞，切勿使用打孔的橡胶或软木塞。
加水：手提式高压锅在主体内加入约3L清水，立式高压锅加水约16L(重复使用需补足水量，水变混浊需更换)。
根据灭菌物品性质设定温度和时间。例如，不含糖等耐热培养基灭菌时间为15分钟(121℃)，含糖类等耐热培养基为15-20分钟，染菌培养物和器械器皿为30分钟。
排气
手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁方管中，盖好顶盖拧紧；立式压力锅通上电源，打开顶盖上的排气阀放出冷气(水沸腾后排气10-15分钟)。
升压灭菌
关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求并维持规定时间。
冷却排气
达到规定时间后，对需干燥的物品立即打开排气阀排出蒸汽，待压力恢复到零时自然冷却至60℃后开盖取物；液体物品则立即去除热源，待自然冷却、压力恢复至零、温度降到60℃以下再打开盖取物，防止液体剧烈沸腾或容器爆破。
存放与记录
合格灭菌物品应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放；凡属合格物品应标有灭菌日期及有效期限；每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。
针对玻璃耐水实验的特殊要求
样品制备：将药用玻璃容器破碎成粒径1-2mm的颗粒，经无水乙醇清洗、烘干后，取10.00g样品置于高压蒸汽灭菌器中，加入50ml实验用水。
测试条件：在121℃条件下维持30分钟，模拟药品在高温灭菌或长期储存过程中可能遭遇的*端水环境。
结果判定：通过盐酸滴定液测定溶液中溶出的碱性物质含量，以每克玻璃颗粒消耗的滴定液体积(ml)作为耐水性分级指标。
