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PCR新手指南:复性温度的选择标准

2025年12月30日 09:52:33      来源:上海嘉鹏科技有限公司 >> 进入该公司展台      阅读量:1

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PCR新手指南:复性温度的选择标准

复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。

在使用温度梯度的方法寻找复性温度时,新手往往会选择扩增产物多的温度条件,然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增,通过温度梯度实验发现,能扩增出来的温度范围般在3-30度。选择的标准应该是可扩增范围的中间温度。
因为:
1、扩增产物量的影响因素很多,有些是随机的。从定量PCR的平台期低的不规律可以看出来。
2、不同仪器、不同位置的温度及温度变化曲线是有差异的。按照仪器厂的出厂标准也准确性+-0.3度及均匀性+-0.3度
3、PCR仪进行梯度扩增时的温度准确性会更差


选择中间温度可以消除仪器温度差的影响。


另外,进行温度梯度时模板量的选择也是非常重要的。


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