血管支架薄截面试样制备

原创 标乐中国 标乐试样秀

是一种金属支架，它具有良好的塑性和几何稳定性，可在闭合状态下经心导管送至病变部位，再用气囊扩张等方法使之展开，起到支撑血管壁的作用。可以将已经狭窄或闭塞的血管撑开，恢复冠状动脉的血流，从而改善心肌供血。

冠状支架的发明人是 Charles Dotter，他在 1969 年研制出**个支架。Charles Dotter 继续改进他的设计并在 1983 年与 Andrew Craig 一起发明了一种可以扩展的支架，这种支架使用镍钛合金制造，目前这种材料也经常用来制作支架。

虽然支架的使用已经变得越来越普遍，但更好地理解人体与支架之间的相互作用仍然是一个重要的临床课题。不同的支架设计、材料、表面涂层和辅助****的研究需要对装有支架的血管进行详尽的组织学和**组织化学分析，特别是在支架原位的细胞组织与金属的界面处。

正确的制备技术将增强对临床支架的细胞反应的理解，特别是在组织支架界面。此外，它还可以对扩展特性进行周密的评估。这样的观察甚至可能促使支架设计的改进及发展。

支架

制备方案

1、切除安装有支架的动脉，用盐水冲洗并浸入盐水中固定两小时。

2、取薄切片之前先将安装有支架的动脉进行镶嵌。选择一种收缩率*小、并且在取薄切片的过程中不会使镶嵌材料发生软化的低粘度环氧树脂，例如 EpoThin2，是一个非常好的选择。

使用时按照产品的说明称量出一定比例的树脂和固化剂并将其均匀混合，搅拌操作时的动作应当和缓以避免产生过多的气泡。将试样放入模具内并将试样与环氧树脂进行真空浸透。*后，浇入足够量的环氧树脂，使其覆盖住试样。

3、在用精密切割机进行切割前，先用 600#（P1200）和 1000#(P2500) CarbiMet® SiC 砂纸，在 EcoMet 30 或者 AutoMet 研磨抛光机或类似的设备上将镶嵌好的试样端面磨光。

4、用接触粘合剂将磨光表面粘接在载玻片上。用 Perspex (一种介电有机玻璃) 做的承物片对镶嵌截面可提供比普通载玻片更大的粘合力。不过，用 600#（P1200）CarbiMet® SiC 砂纸对普通载玻片进行预磨光也能改善其粘合性能。

5、选择一种能使切割损耗 (即由于切割片本身的厚度在切割过程中对试样材料产生的磨耗) *小的切割片进行切割。

注：使用薄切割片时选用的法兰盘（切割片的支撑）应当能提供*大的支撑，以避免切割时发生弯曲或扭动。粘接了立方氮化硼的 IsoCut® 型薄切割片能够在每 15 mm 的支架上切割出28至30个截面。

6、将经过镶嵌的试样装在 Isomet High Speed 精密切割机的夹钳上。将显微测微计进行校准，从试样载玻片一端截取 50-100μm 厚的截面。

7、重复步骤 3 和 4，制备下一个截面的表面。重复这一过程并将陆续得到的截面分别粘接在载玻片上。

8、用一系列的 CarbiMet® SiC 砂纸将每个截面磨光至厚度为 10–20μm。使用砂纸研磨是因为 SiC 磨料颗粒固定在纸基上不至于嵌入试样中的细胞分。磨光先从 320# (P400) 砂纸开始，接着使用 360# (P600)、400# (P800)、600# (P1200)、1000#(P2500) 砂纸。磨光时要仔细，避免使材料去除过快和不均匀。在转入下一道砂纸以前要检查是否已经获得均匀的划痕。

9、用 3μm 的 UltraPrep™ 金刚石研磨薄膜进行抛光，然后就可以进行显微观察。

安装了支架的动脉薄截面显微组织，

显示出了细胞组织与支架的界面

自动化制备设备/特殊夹具
如果打算用手工方法对薄截面试样进行磨光和抛光，操作者应具有相当丰富的经验，所需的时间也较长。用手工方法磨薄截面试样也容易将试样磨偏，使截面一侧的厚度小于另一侧。

表面和厚度不均匀的截面试样不能为组织化学分析提供*佳的条件。为了制备用于组织学和**组织化学染色的试样，试样应当磨光至 5μm 并且厚度均匀。

为了将以上提到的问题减至*小，当试样需要用手工方法制备时，可以使用具有固定截止环的定量磨削夹具。例如，组织学精密磨光夹具 (产品编号 60-8100) 具有用碳化物做的截止环，可以避免使试样磨光过度并使试样获得均匀的所需厚度。夹具适用的载玻片尺寸为 28 x 48mm。

大多数半自动研磨抛光机再加上岩相学/组织学用的薄截面载玻片夹持器并使用单点力加载方式，就可以使磨光过程自动化。使用低温蜡带将包含薄截面试样的载玻片粘结在夹具上。然后将每一个载玻片夹持器放入单点力夹具中。对每块试样施加的载荷为 15-25N，力值取决于样品大小及所需的材料去除速率。至多每隔 2 分钟对试样的制备效果进行评估直到达到*佳制备效果为止。