CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞系广泛应用于生物制药和基因工程研究中,尤其是用于重组蛋白的生产和细胞培养。在CHO细胞的实验中,检测细胞残留DNA非常重要,以避免其他细胞系或外源DNA的污染。
对于CHO细胞的残留DNA检测,常用的方法与293T细胞类似,主要包括以下几种:
1. PCR检测
PCR(聚合酶链式反应)是检测细胞系DNA残留常用的方法之一。通过设计特异性引物,可以检测到CHO细胞的特征性基因或外源DNA。例如,可以使用CHO细胞基因(如CHO细胞的特定基因组序列)作为目标序列,来检测是否有CHO细胞的DNA残留。
步骤:
提取细胞DNA。
使用针对CHO细胞DNA特征性序列的引物进行PCR扩增。
根据PCR产物的大小和强度判断是否有CHO细胞DNA残留。
2. qPCR(定量PCR)
qPCR是一种定量检测方法,能够精确测量残留DNA的量。使用特定的引物和探针,可以定量分析CHO细胞的DNA数量。相比传统PCR,qPCR具有更高的灵敏度和精确度,适合在低浓度DNA残留的情况下进行检测。
步骤:
提取细胞DNA。
使用针对CHO细胞特定基因的引物进行qPCR。
根据荧光信号强度分析DNA的定量水平。
• 经过优化的样品制备,适用于从各种复杂的样品基质中定量回收DNA
• 采用经考验的实时定量PCR技术进行高灵敏度的定量检测
• 特异针对目标宿主细胞DNA进行检测
• 在预期的DNA的片段大小范围内,结果保持良好的一致性
• 准确、可靠且可重复的结果
提供下列目前常用细胞系的分析检测:
CHO、E. coli、293T(Human)
DNA残留定量系统包括:
• TaqMan®引物和探针
• TaqMan®预混液
• 宿主细胞基因组DNA标准品
• 阴性对照