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反转录pcr试剂盒反应条件

2025年09月24日 11:43:31      来源:工业之家 >> 进入该公司展台      阅读量:6

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反转录pcr试剂盒反应条件:
 
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
 
◇循环次数
 
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
 
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
 
◇Anneal以及Extension
 
合适的Anneal温度通常在45~68℃之间(预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性,因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度,进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时,时间设定可稍长一些。通常,Anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;Anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,Extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而Extension时间太长时,会出现Smear。
 
实验外包:
 
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
 
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
 
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
 
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
 
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
 
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
 
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
 
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
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