封闭液的主要作用:
减少非特异性结合(降低背景信号)
这是封闭液核心的功能。实验载体(如PVDF膜、NC膜、微孔板、组织切片等)表面通常带有电荷或具有疏水性区域,这些区域会非特异性地吸附后续加入的抗体或其他蛋白质。
封闭液中含有高浓度的“无关蛋白”(如牛血清白蛋白BSA、脱脂奶粉中的酪蛋白等),它们能优先占据这些非特异性结合位点。
当加入一抗或二抗时,由于这些位点已被封闭,抗体就更不容易随机粘附上去,从而大大降低了背景噪音,使特异性信号更加清晰。
提高检测的信噪比(Signal-to-NoiseRatio)
通过降低背景(噪声),目标条带或阳性信号(信号)与周围区域的对比度显著增强,结果更容易判读,数据更可靠。
保护抗原和抗体活性
某些封闭剂(如BSA)可以稳定溶液环境,防止抗体在非目的位点变性或失活,有助于维持其结合能力。
防止载体干燥
在孵育过程中保持膜或板的湿润状态,避免因干燥导致的假阳性或信号损失。
