DNA提取是从细胞或组织中分离纯净DNA的过程,广泛应用于分子生物学、基因组学和法医科学等领域。以下是DNA提取的一般步骤和方法。
1.样本准备:
选择样本,如细胞(血液、肿瘤细胞)或组织(植物或动物组织)。
对样本进行冷冻或使用RNA/DNA保护剂,以防止降解。
2.细胞裂解:
使用细胞裂解缓冲液(含有表面活性剂如SDS或Triton X-100)将细胞膜破坏,释放DNA。
如果是组织样本,可以通过机械研磨、超声波或酶解(如蛋白酶K)来帮助细胞裂解。
3.蛋白质去除:
加入酚/氯仿等有机溶剂,或者使用离心柱方法(如商业化的DNA提取试剂盒),以分离DNA和蛋白质。
经过离心后,DNA会分在水相中,蛋白质和杂质则在有机相(下层)中。小心地移取上层水相。
4.DNA沉淀:
向水相中加入一定体积的冷乙醇或异丙醇,使DNA沉淀。
离心收集DNA沉淀,通常可以在-20°C下存放几小时以提高沉淀效果。
5.洗涤:
用70%乙醇或冷洗液洗涤DNA沉淀,以去除杂质和盐分。
6.重溶:
将洗涤后的DNA沉淀在无RNA酶的缓冲液(如TE缓冲液,Tris-EDTA)或水中重溶。
轻轻混匀以确保全部溶解。
DNA提取的注意事项
1.避免污染:在整个过程中使用无DNA酶的设备和试剂,避免交叉污染。
2.设备与试剂的选择:在选择提取方法和试剂盒时,根据样本类型和实验需求进行选择,有些商业试剂盒能在较短时间内快速提取高纯度的DNA。
3.质量检测:提取后,可以使用分光光度计测量DNA浓度(一般在260 nm波长下测量),并通过琼脂糖电泳检查其完整性。
通过DNA提取,可以获得适用于各种分子生物学实验的高质量DNA,为后续的扩增、克隆、测序和分析提供基础。
