CCK-8试剂盒的反应机制
CCK-8试剂盒是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的高灵敏度、操作简便的比色法检测试剂盒。其核心成分是WST-8，是MTT法的升级替代方案。
CCK-8试剂盒的反应机制：
活细胞线粒体中的脱氢酶能将WST-8还原。
还原后的WST-8生成橙黄色的甲臜产物。
甲臜的生成量与活细胞的数量成正比。
检测方法：使用酶标仪在450nm波长处测定溶液的吸光度（OD值）。OD值越高，代表活细胞数量越多，细胞增殖越旺盛或细胞毒性越小。
CCK-8试剂盒的注意事项
设置重复孔：注意设置2-3个重复孔，分别为接受处理的细胞组、未处理的细胞对照组和无细胞培养基的对照组。
避免气泡产生：在加入CCK-8溶液时，注意不要在孔中生成气泡，否则会影响OD值的读取。
细胞数量与孵育时间：初次实验者，可以选择几个不同的培养时间点如1h、2h、4h用酶标仪进行检测，以便选择出适宜的吸光度范围进行实验。同时，根据细胞种类、数量、活力等情况调整孵育时间。
波长选择：如无450nm滤光片，可用430-490nm范围内的滤光片。若样品为浑浊的细胞悬液时，可以选用大于600nm的波长，如650nm作为参比波长进行双波长测定。
避免干扰：本试剂盒的检测依赖于脱氢酶的催化反应，因此当检测体系中有还原性物质如葡萄糖、维生素C等存在时，会干扰测定。若待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物影响。
细胞毒性：CCK-8试剂盒对细胞无明显毒性，可在不同时间进行多次测定，便于寻找最佳测定时间。但为了避免CCK-8溶液可能带来的对于后续检测的影响，除非细胞极为稀少，否则不推荐在CCK-8检测后再用于其他实验。
