液相色谱压力异常

影响因素影响系统压力的因素主要有流动相的溶剂组成、温度及流速这三方面：

1.流动相的粘度是产生反压的主要原因，下图为有机溶剂－水的粘度随组成与压力的关系图：

由上图可以看到，乙腈－水比例为     （20:80）、甲醇－水比例为（40:60至50:50）时，系统的压力。因此，在做实验时应尽量避开这个比例范围。另外，异丙醇粘度大，一般不作流动相使用。

 2.流速对反压的影响是线性关系，流速增加，反压亦增大。

 3.温度对反压的影响是反比关系，温度升高，反压降低，对某些流动相的影响更大一些。

 4.液相色谱仪各模块之间的连接管路也会产生压力，系统压力与管路的长度成正比，与管路直径的四次方成反比（1/4D）。上述考虑的是柱外因素对系统压力的影响，色谱柱对系统压力的影响也很大，反压与色谱柱长度成正比，与填料颗粒度的平方成反比（2.5μｍ填料比3.5μｍ填料反压高）。

压力原因

具体到压力问题的表现形式上，主要有压力高、压力低或没有压力以及压力不稳。

造成压力高问题的主要原因有：温度太低；流速太高；流动相粘度大；管路堵塞；仪器或色谱柱堵塞；压力传感器问题。系统压力高的故障排除流程图如下：

产生压力低情况的可能原因：系统内有渗漏处；单向阀堵塞；入口管路有气泡；溶剂滤头堵塞；所用溶剂不正确，储液瓶中无溶剂；温度太高，流速太低；泵未输送流动相；泵关闭或保险丝断了。

压力波动

1.脱气机排气不充分；

2.流动相未正确脱气；

3.所用溶剂不混溶或易挥发；

4.压力传感器及泵问题。

其中，大多数的压力波动都是由于气泡引起的

基线噪音大

1.流动相中有气体–溶剂脱气；

2.流动池中有气泡–在出口处使用0.009”的管路；

3.色谱柱上的污染物被洗脱–平衡系统，直至基线稳定；如样品中有保留非常强的组分，可设置强洗脱程序；

4.渗漏–此时应修复渗漏，重新连接或更换接头；

5.检测器灯能量低–更换灯；

6.灵敏度太高–使用合适的采样频率，调节增益（如ELSD检测器）；

7.检测器流动池脏–清洁流动池；

8.电噪音–除去电噪音的来源：屏蔽电缆，清洁触点；

9.采样频率设置过大–一味追求高采样频率，可能对灵敏度没有任何帮助，同时也会产生比较大的噪音：UV检测器推荐降低采样频率，HPLC推荐1-5Hz，UPLC推荐20Hz。

同步的基线噪音

1.大多数情况下都是泵引起的，泵头中存在空气–将溶剂脱气，并重新灌注泵；

2.单向阀问题–超声清洗单向阀或更换；

3.柱塞杆断裂–更换；

4.混合问题–更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积；

5.电噪音–改变电路，除去来源。

不同步的基线噪音

1.气泡—流动相要脱气；

2.检测器中有气泡／空气—流动相脱气，或在检测器的后面加反压（不适用于RI检测器）；

3.渗漏—特别是肉眼无法发现的微漏或者泵的内漏，会造成流速的变化和混合比例的变化，从而导致基线噪音，此时应修复渗漏，重新连接或更换接头；

4.管路堵塞—除去堵塞，冲洗系统；

5.电噪音—除去来源，改变电路。

Cyclic基线

1.温度影响–隔离热源，或搬离临近的通风口，或增加流动池温度；

2.混合问题–更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积；

3.流动相中的气体–溶剂脱气；

4.泵不稳定–检查维修泵；

5.管路堵塞–冲洗系统，排除并除去堵塞源头；

6.电问题–改变电路，或除去根源。

基线漂移：上漂或者下漂

1.梯度变化引起，如溶剂Ｂ的吸收值高于溶剂Ａ–使用基线差减，或尝试新的流动相；

2.化合物从色谱柱上洗脱–平衡系统，直至基线稳定；如样品中有保留非常强的组分，可设置强洗脱程序；

3.溶剂改变（气体吸附，蒸发）–氦气脱气，隔离溶剂；

4.溶剂渗漏–拧紧或者更换接头；

5.检测器温度影响（尤其是示差，电化学以及电导检测器）–流动池温度调节；

6.柱温波动–等待柱温平稳，使用柱预加热器；

7.压力变化–过滤溶剂以及样品，或样品太粘稠；

8.混合问题–更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积。