精子细胞BWW培养基
正常精液是一种混合物,在射精时由睾丸和附睾的分泌物及悬浮其中的精子与前列腺、精囊腺和尿道球腺的分泌物混合而成,最终射出的混合物是一种粘稠的液体,精子分析的方法有很多,其中可通过培养进行检测。
精子细胞BWW培养基又称为获能培养液(capacitatingmedium),主要由系列盐离子、酚红、葡萄糖、丙酮酸钠、BSA等以及抗生素组成,每1000ml BWW培养基中含100,000U钠盐和100mg素,是一种旨在用于广谱动物和人体精子细胞获能处理的常用营养液,其标准化成分配方依据Biggers-Whitten-Whittingham(BWW)研究小组在1971年发表的成果,适合于各种动物和人体精子细胞处理,该试剂经无菌处理。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1、无菌离心管、离心机、细胞培养箱
操作步骤(仅供参考):
1、取干净的精液样本室温放置30-60min,使之充分液化。
2、制备精子细胞(仅供参考,不是必须步骤):
1)上泳法:取一个无菌的15ml锥底离心管,加入1ml液化的精液,在其上方轻轻加入Earle培养液1.2ml,45°倾斜试管,37℃孵育1h,轻轻竖立试管,取出最上层的1ml液体,加入8ml增补的Earle培养液稀释,500g离心5min,弃上清,加入Earle培养液0.5ml重新悬浮细胞,用于精子密度或功能的评估。
2)非连续密度梯度法:取一个无菌的15ml锥底离心管,加入3ml 80%的Percoll。轻轻加入3ml 40%的Percoll于80%的Percoll液面上,小心操作,不要打乱两种液体的界面。轻轻加入1~2ml精液于梯度溶液上,500g离心20min,弃上清,将管底的精子团重新悬浮于5~10ml的Earle培养液中,500g离心5min,弃上清,加入1mlEarle培养液,重新悬浮。
3、将含有精子细胞的离心管置于37℃含5%CO2、95%空气的细胞培养箱中孵育1h;如无
上述培养箱,可将离心管密封加盖,置于37℃的普通培养箱内孵育;在孵育过程中,大多数活动的精子从精浆中游离到覆盖上面的培养液内。
4、500g离心精子悬液5min,使精子细胞密度接近于10×106/ml,将精子重悬于0.5~
1ml精子细胞BWW培养基中,并在37℃含5%CO2、95%空气的细胞培养箱内孵育
18~24h;如无上述培养箱,可将离心管密封加盖,置于37℃的普通培养箱内孵育。注意:在孵育过程中将试管20°倾斜。