人结肠癌细胞株直接来源于ATCC,公司海外直接购买,未经代理,细胞真实。购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,进口来源,质量保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。
人结肠癌细胞株培养注意事项:
1.收到细胞后,请将培养瓶放入37度培养箱,放置4小时,使细胞回到正常温度。
2.将培养瓶内培养基用移液管吸到另一无菌瓶内,培养瓶内保留5-6ml培养基继续培养至少24小时方可传代,吸出的培养基4度保存(如吸出培养基有较多碎片,3000转离心10分钟,取上清保存),用于后续培养。强烈建议您使用吸出培养基培养至少2-3代,并在更换新培养基前冻存几支细胞。
3.如有Greiner细胞培养瓶,可取一个新的T25 flask,取其瓶盖,更换原培养瓶的瓶盖。如使用原瓶盖,则需要稍稍拧松瓶盖,使气体能够进入。
4.37度培养至少24小时,当细胞密度符合传代要求时,PBS清洗细胞,加入1ml酶,消化细胞传代。当80%以上细胞培养瓶轻轻晃动能脱落时,加培养基终止消化,吹打成单细胞,吸入15ml离心管,1000转离心5分钟。
5.离心后弃上清,加入新培养基吹打重悬细胞成单细胞,加入新的培养瓶中继续培养。
6.用吸出培养基传2-3代后请及时冻存细胞。
贴壁细胞冻存方法:
每个T75或10cm培养皿的细胞消化离心后弃上清。加2ml细胞冻存液(90%FBS+10%DMSO),吹打均匀,加入2个细胞冻存管。立即放入细胞冻存盒(Nalgene 5100-0001),加异丙醇到刻度线,放-80℃冰箱。24小时后将冻存管转到液氮中长期保存。